社會議題RNA實驗所用到的DEPC水滅菌原因?? - 社會議題Carolina Franco · 2008-05-08Table of ContentsPostCommentsRelated Posts請問在做RNA方面的實驗所用到的DEPC水DEPC是RNase的抑制劑..當與ddH2O混和後拿去滅菌...滅完菌後其失去了RNase的抑制作用....那...為什麼要拿去滅菌...其原因為和??社會議題All CommentsHedda2008-05-09在回答這之前要先了解DEPC的特性:DEPC抑制RNase的方式:DEPC(焦碳酸二乙酯 diethyl pyrocarbonate)藉由通過和RNase的活性中心(active site)中histidine(組氨酸)的imidazole ring(咪唑環)結合使RNase蛋白變性,進而抑制降解RNA的活性。下面的圖片連結有詳細機制(diethyl pyrocarbonate就是DEPC),看左半部的圖即可:http://www.scielo.br/img/revistas/bjmbr/v38n6/5676...回到您的問題,DEPC處理過的水要通常用來進一步做RNA相關的實驗,有些實驗則需要加入酵素反應,此時若DEPC未經滅菌方式使其失去活性,我們所加入的酵素有可能會因DEPC對於imidazole ring的結合而失去其活性,影響後續實驗的進行。另外一點,當在用DEPC處理ddH2O過程中,從盛裝ddH2O到加入DEPC水的過程,難免容器、空氣中都會有細菌存在,所以基本上做這些實驗滅菌是必要的。因此,我額外一提,滅完菌的DEPC-ddH2O,必須小心使用,做RNA實驗的都知道,實驗衣、手套、口罩甚至浴帽等都很重要,因為大自然中處處都是RNase,幫括我們人身上皮膚、唾液等都會產生RNase,藉著穿這些衣物以防止RNase的污染,所以DEPC-ddH2O的保存與使用最好都要在RNase-free的環境下。 2008-05-09 18:12:51 補充:維基百科介紹的imidazole ring(咪唑環):http://zh.wikipedia.org/wiki/%E5%92%AA%E5%94%91Related Posts不當的宗教放生外來物種可能對當地原生物種造成何者影響呢?真的有所謂的省電裝置嗎?請問修平化工生技與環球生技哪間比較好??南實踐大學觀光管理學系[20點]?請問考外交特考
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DEPC抑制RNase的方式:
DEPC(焦碳酸二乙酯 diethyl pyrocarbonate)藉由通過和RNase的活性中心(active site)中histidine(組氨酸)的imidazole ring(咪唑環)結合使RNase蛋白變性,進而抑制降解RNA的活性。
下面的圖片連結有詳細機制(diethyl pyrocarbonate就是DEPC),看左半部的圖即可:
http://www.scielo.br/img/revistas/bjmbr/v38n6/5676...
回到您的問題,DEPC處理過的水要通常用來進一步做RNA相關的實驗,有些實驗則需要加入酵素反應,此時若DEPC未經滅菌方式使其失去活性,我們所加入的酵素有可能會因DEPC對於imidazole ring的結合而失去其活性,影響後續實驗的進行。
另外一點,當在用DEPC處理ddH2O過程中,從盛裝ddH2O到加入DEPC水的過程,難免容器、空氣中都會有細菌存在,所以基本上做這些實驗滅菌是必要的。
因此,我額外一提,滅完菌的DEPC-ddH2O,必須小心使用,做RNA實驗的都知道,實驗衣、手套、口罩甚至浴帽等都很重要,因為大自然中處處都是RNase,幫括我們人身上皮膚、唾液等都會產生RNase,藉著穿這些衣物以防止RNase的污染,所以DEPC-ddH2O的保存與使用最好都要在RNase-free的環境下。
2008-05-09 18:12:51 補充:
維基百科介紹的imidazole ring(咪唑環):
http://zh.wikipedia.org/wiki/%E5%92%AA%E5%94%91